基于HK—2细胞的泽泻萜类组分体外肾毒性评价及其诱导细胞凋亡作用的探究(3)

http://www.100md.com 2016年2月1日 中国中药杂志2016年第3期

     收集各组细胞(约1×10₇个)，根据mRNA表达Trizol一步法说明提取细胞总RNA，测定其纯度及浓度。cDNA的合成根据TaKaRa反转录试剂盒说明合成。以GAPDH作为内参，引物由华大基因公司合成，引物序列见表1。按照TaKaRa试剂盒说明，选择10 μL的反应体系，包括SYBRPremix Ex Taq II ( 2X ) 5 μL cDNA模板0.8 μL，上下游引物(10 μmol·L^-1 )各0.4 μL，dH₂O 3.4 μL。扩增条件：95 ℃预热30 s；95 ℃变性5 s，退火温度30 s，扩增39个循环；最后65 ℃延伸5 s；每组设3个复孔。以各组的基因的表达量与内参照GAPDH的比值作为其相对表达量。

    2.6统计学处理

    实验过程中所产生数据均采用 SPSS 16.0 进行处理，并且各组间数据比较采用t检验 ......